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发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立
来源：食品科学网 阅读量: 136 发表时间: 2021-08-09
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作者: 王 赞，李 献，王 慧，许苗苗，张 捷，刘 帅，周 巍，史国华
关键词: 依赖解旋酶恒温基因扩增法；发酵乳；沙门氏菌；快速检测；基础应用
摘要:

建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification，HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因，设计特异性引物，优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量，建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌，扩增其产物后进行电泳检测，验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好，优化后反应体系体积50 μL时，UvrD解旋酶添加量为0.10 μg，T4 gp32添加量为5.0 μg，得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物，检出限为2.6×102 CFU/g；该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求，具有较高的灵敏度、易操作，可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。

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