为高效利用大鲵加工副产物大鲵皮,对大鲵皮胶原抗氧化肽的制备及分离纯化进行研究。以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为评价指标评价其抗氧化活性,研究大鲵皮胶原抗氧化肽的制备工艺,确定最适工艺条件,即酶添加量8 000 U/g、酶解pH 9.0、酶解温度55 ℃、酶解时间4 h。在此工艺条件下,大鲵皮胶原抗氧化肽DPPH自由基清除率为40.2%。采用超滤分离得到分子质量不同的3 个组分,即P1(>6 kDa)、P2(3~6 kDa)、P3(<3 kDa),其中P3具有较强的抗氧化活性,DPPH自由基清除率为56.7%。在此基础上,进一步采用凝胶色谱技术分离,通过Sephadex G-25分离纯化P3,得到不同分子质量的3 个组分(SP1、SP2、SP3),其中SP3具有较强的抗氧化活性,DPPH自由基清除率为72.3%。最后采用氨基酸自动分析仪技术进一步分析SP3的氨基酸组成,探寻大鲵皮胶原肽抗氧化活性与其氨基酸组成之间的内在联系。结果表明:大鲵皮胶原抗氧化肽氨基酸组成中,甘氨酸、脯氨酸含量较高,胱氨酸含量较低,这一特征符合胶原抗氧化肽的氨基酸组成特征;除甘氨酸、脯氨酸含量较高外,大鲵皮胶原蛋白抗氧化肽中还含有较高含量的具有明显抗氧化活性的丙氨酸、精氨酸、谷氨酸、亮氨酸等氨基酸,这可能是大鲵皮胶原抗氧化肽SP3具有较高抗氧化活性的原因。
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