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—— 中国食品杂志社
目的：解析大蒜胞外囊泡（garlic-derived extracellular nanovesicles，GENs）的活性成分并探究其对小鼠结肠炎的作用。方法：采用超速离心与蔗糖密度梯度离心法从蒜汁中分离纯化GENs，并对其形貌和结构进行表征。采用液相色谱串联质谱联用仪对GENs进行脂质分析和蛋白质组学分析；采用RNA转录组测序技术进行小RNA（microRNA，miRNA）序列鉴定和靶基因预测分析。构建Caco-2单层肠上皮细胞模型，脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激后，通过荧光光谱测定细胞渗透表观系数；采用试剂盒法测定上清液中一氧化氮（nitric oxide，NO）含量；采用酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）测定细胞上清液中白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）质量浓度。C57BL/6J小鼠口服给予GENs（20、100、500 mg/（kg mb·d）），评估GENs的毒性，同时考察GENs对质量分数3%葡聚糖硫酸钠（dextran sulphate sodium，DSS）诱导结肠炎小鼠的疾病活动指数（disease activity index，DAI）评分和结肠长度的影响；采用苏木精和伊红对结肠组织切片进行染色；采用ELISA和试剂盒法测定小鼠血清中IL-6、IFN-γ、TNF-α和NO的水平。结果：GENs为纳米级杯状囊泡，含有26 种脂质、62 种蛋白质和317 种miRNA，脂质中磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine，PC）含量最高，预测出5 种miRNAs可靶向编码人炎性细胞因子的基因。GENs能显著减轻LPS引起Caco-2单层细胞的损伤，抑制NO的产生，调节细胞因子IL-6、IFN-γ、TNF-α和IL-1β分泌水平。体内实验表明，各剂量范围内GENs无毒性；当GENs剂量为100 mg/（kg mb·d）时能显著降低小鼠DAI评分（P＜0.05），改善DSS引起的结肠缩短和病理损伤，下调DSS引起的血清中IL-6、IFN-γ及NO水平升高。结论：GENs可能通过磷脂酰胆碱和特定miRNA共同作用，保护肠道屏障损伤，调节炎性介质分泌水平，抑制细胞内炎症反应，缓解DSS诱导的小鼠结肠炎。
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