
为实现对嗜热链球菌活菌数的高效精准定量,本研究创新性地将自主设计的寡核苷酸探针(novel oligonucleotide probe,NOP)与叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)核酸染料相结合,利用流式细胞术(flow cytometry,FCM)构建PMA-NOP-FCM检测方法。其中PMA在光敏条件下与死菌DNA不可逆共价交联,使死菌携带红色荧光,嗜热链球菌与NOP特异性杂交携带绿色荧光,最后通过流式分析技术识别计数嗜热链球活菌。该方法特异性良好,能够准确识别并定量嗜热链球菌活菌;方法的定量限为8.3×104 cells/g,在104~108 cells/g与平板计数法具有良好的线性关系;相对标准偏差为4.68%,具有较高精密度;检测时间为2 h,显著优于平板计数法。该方法在酸奶加标样品中的回收率为91.61%~106.17%,经验证可有效用于不同市售品牌酸奶的检测。PMA-NOP-FCM方法为酸奶工业化生产中菌群活性监控提供了高精度、高效率的技术解决方案,对酸奶质量控制具有重要实践意义。
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