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—— 中国食品杂志社
本研究建立阪崎克罗诺杆菌（Cronobacter sakazakii）和单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）双重微滴式数字聚合酶链式反应（droplet digital polymerase chain reaction，ddPCR）快速定量检测方法。针对C. sakazakii ompA和L. monocytogenes plcB基因设计特异性引物探针，优化反应参数并对该方法进行灵敏度、特异性和重复性实验，验证其在80 份实际样本中的应用效果。结果表明，本研究所建立的双重ddPCR方法最佳反应条件为退火温度56 ℃、引物浓度600 nmol/L，C. sakazakii和L. monocytogenes探针浓度分别为350 nmol/L和500 nmol/L。特异性实验显示该体系与其他常见食源性细菌无交叉反应，特异性强。重复性实验结果显示，批内与批间变异系数均小于16%，具有良好重复性。灵敏度实验结果显示，针对C. sakazakii ompA和L. monocytogenes的双重ddPCR方法最低检出限分别为7.51 拷贝/反应和8.02 拷贝/反应，显著优于传统荧光定量PCR方法。本研究构建的双重ddPCR检测体系具有特异性强、稳定性好等优势，可为食源性致病菌的无增菌绝对定量检测提供技术支持。
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