
采用适应性实验室进化策略,30 ℃、180 r/min振荡培养24 h后,将酿酒酵母菌体于–20 ℃放置24 h,再接入培养基中培养24 h,如此循环100次,培育耐冷冻酿酒酵母菌株。对进化菌株(F100代)和亲本菌株(F0代)进行存活率测定和转录组分析。结果表明,F100代菌株在–20 ℃条件下保存20 d的存活率达21.3%,显著高于F0代菌株(4.8%)。转录组学分析表明,F0代菌株与F100代菌株间共筛选出445个显著差异表达基因,其中上调基因187个、下调基因258个。京都基因与基因组百科全书通路富集分析显示,差异基因主要富集于糖酵解/糖异生,碳代谢,氨基酸的生物合成,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,果糖和甘露糖代谢等能量代谢通路,且该类通路中下调基因呈现高度重叠特征;同时,碱基切除修复相关基因在进化菌株中表达显著上调。上述代谢通路与修复基因的表达调控共同提升了酿酒酵母在冷冻环境下的存活能力。本研究结果完善了酿酒酵母冷冻胁迫应答机制,可为解析微生物低温耐性调控机理提供新的研究思路,对冷冻面团专用菌种选育及相关技术发展具有重要应用价值。
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