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—— 中国食品杂志社
该研究通过人工合成技术获得嗜盐菌Vreelandella sp. CH40中耐盐羧酸酯酶Est40的编码基因,经聚合酶链式反应（PCR）引入酶切位点和标签序列后,将其整合至pET-22b（+）表达载体,获得重组质粒后导入大肠杆菌（Escherichia coli）Rosetta（DE3）宿主细胞,构建高产耐盐羧酸酯酶Est40的重组工程菌株。进一步以重组羧酸酯酶Est40活力为响应值,通过单因素、Plackett-Burman试验及Box-Behnken响应面试验对重组工程菌株的发酵条件进行优化。结果表明,重组羧酸酯酶Est40在大肠杆菌表达系统中获得高效可溶性表达,重组工程菌株产羧酸酯酶Est40最佳发酵条件为蔗糖35 g/L、MgSO4 12 g/L、酵母粉15 g/L、NaCl 20 g/L、初始pH 7.5、诱导温度24 ℃、接种量6%。在此优化条件下重组羧酸酯酶Est40活力达到（378.63±2.76） U/mL,较优化前[（273.17±2.27） U/mL]提高38.61%。该研究结果为后续的工业化放大生产提供了重要的工艺参数和理论依据。
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