
以小曲白酒发酵醪液为研究对象,采用透明圈结合福林酚法筛选产蛋白酶菌株,经形态学观察、生理生化实验及分子生物学技术鉴定菌株,通过单因素试验及响应面法优化产蛋白酶条件,并对其酶学性质进行分析。结果表明,筛选出一株高产蛋白酶菌株B2,鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。该菌株在2%~4%乙醇环境中生长良好,具备一定的乙醇耐受性。菌株B2产蛋白酶系的最佳培养条件为:培养基初始pH 6、发酵温度37 ℃、发酵时间24 h;培养基组成:麦芽糖17 g/L、蛋白胨11 g/L、硫酸锰0.9 g/L。在该条件下,菌株的蛋白酶活力最高可达39.44 U/mL,相较优化前提升37%。酶学性质分析显示,该蛋白酶系的最适反应温度和pH值分别为50 ℃和7,乙醇体积分数12%时,相对酶活力仍保持70%以上,具有较好的乙醇耐受性,抑制剂实验表明,菌株B2分泌的蛋白酶是由丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶构成的复合酶系。本研究结果可为贝莱斯芽孢杆菌B2发酵应用及乙醇耐受型蛋白酶开发提供科学依据与基础数据。
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