食源性抗氧化肽安全性高,抗氧化能力较好,近年来成为多肽研究领域的热点。本实验以蛋清源抗 氧化肽WNWAD(Trp-Asn-Trp-Ala-Asp),及其拆分肽WNW(Trp-Asn-Trp)、WAD(Trp-Ala-Asp)、WN (Trp-Asn)、AD(Ala-Asp)为研究对象,首先采用2’-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(2,2’-azino-bis(3- ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS)体外抗氧化评价方法,对5 条肽的抗氧化活性进行了评价,建立H2O2 诱导的人胚肾细胞(HEK293)氧化损伤模型,利用HEK293细胞模型评价5 条肽的抗氧化活性,然后检测抗氧化 肽WNWAD对细胞氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)含量的影响,最后利用酶联免疫吸附测定试剂盒 检测了炎症因子人白细胞介素-8及人肿瘤坏死因子的含量。结果表明:活性肽浓度为40 μmol/L时,WNWAD清除 ABTS+?能力最强,Trolox抗氧化当量(Trolox equivalent antioxidant capacity,TEAC)为(98.411±0.020)μmol TE/L, 其次为WN、WNW、WAD,其TEAC分别为(96.629±0.008)、(94.978±0.003)、(88.807±0.003)μmol TE/L, AD没有ABTS+?清除能力。在H2O2浓度为400 μmol/L时,细胞相对存活率为(50.240±0.505)%,有高度显著性差 异(P<0.001),不同浓度的蛋清源活性肽对H2O2诱导的HEK293细胞氧化损伤均有保护作用,且随着各条肽浓度 升高保护作用呈增强趋势,其中WNWAD的保护作用最强,浓度为30 μmol/L时,细胞存活率已高达99.12%。并且 WNWAD可明显降低细胞中GSSG含量,降低炎症因子人白细胞介素-8和人肿瘤坏死因子的含量。以上研究结果显 示蛋清源活性肽对降低HEK293细胞氧化应激水平、提高细胞抗氧化能力、抗炎能力等有重要作用。
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