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—— 中国食品杂志社
本研究基于纳米抗体（nanobodies，Nbs）建立鼠伤寒沙门氏菌的双抗夹心酶联免疫吸附测定法。使用灭活后的鼠伤寒沙门氏菌为免疫原对新西兰大耳白兔进行5 次免疫，获取兔抗鼠伤寒沙门氏菌血清，经测定第5次加强免疫后的兔抗免疫球蛋白效价达1∶24 300。对羊驼进行5 次免疫，分离羊驼淋巴细胞提取RNA反转录成cDNA，并通过聚合酶链式反应扩增Nb序列。酶切Nb基因和噬菌体展示载体pComb3XSS并连接后回收，将回收产物电转至ER2738感受态细胞，获得鼠伤寒沙门氏菌的Nb免疫文库，文库库容为1.10×1010 CFU/mL，Nbs基因插入率为100%。加入辅助噬菌体M13KO7救援，库容达到1.80×1013 PFU/mL。通过4 轮固相淘选，利用噬菌体-酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）筛选得到16 个阳性克隆，经测序鉴定为同一株Nb，命名为Nb-16。将其在大肠杆菌BL21（DE3）PLysS感受态细胞中表达，结合兔多抗建立了基于Nb-16的双抗夹心ELISA检测方法，该方法半数最大有效浓度（half-maximal effective concentration，EC50）为6.071×105 CFU/mL，EC20～EC80为8.944×104～4.121×106 CFU/mL，检测限为1.3×104 CFU/mL，定量限为1.7×104 CFU/mL。特异性验证该方法对其他常见致病菌无交叉反应，生菜加标样本检测证实，本方法回收率约为89%，为蔬菜中鼠伤寒沙门氏菌监测提供了可靠的新方案，为食品和饲料中鼠伤寒沙门氏菌的快速检测提供了新途径。
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