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—— 中国食品杂志社
为满足水产品中副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的快速检测需求，设计针对V. parahaemolyticus ToxR基因的特异性重组酶聚合酶等温扩增（recombinase polymerase amplification，RPA）引物，以及成簇规律间隔短回文重复序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）相关RNA（CRISPR RNA，crRNA），通过优化检测条件，建立一种基于RPA-CRISPR/CRISPR相关蛋白12a（CRISPR-associated protein 12a，Cas12a）技术的一管式快速检测方法，并分析该方法的特异性和灵敏度，同时对模拟污染样品进行检测。结果表明，在最优检测条件（crRNA终浓度100 nmol/L、Cas12a与crRNA浓度比0.5∶1、报告探针与Cas12a浓度比2.2∶1）下，该方法可在37 ℃恒温条件下30 min内完成检测。其特异性良好，与常见病原菌之间无交叉反应；灵敏度高，对纯培养V. parahaemolyticus的检出限可达102 CFU/mL，对模拟污染样品的检出限为1.5 CFU/mL。综上，本研究建立的一管式RPA-CRISPR/Cas12a检测方法具有高灵敏度、强特异性、操作简便等优势，可为水产品中V. parahaemolyticus的高通量快速检测提供可靠的技术手段。
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