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—— 中国食品杂志社
为开发耐高温的高效工业生物催化剂,该研究人工合成无氧芽孢杆菌（Anoxybacillus sp.）YHS0032源嗜热海藻糖酶Adb1332基因,通过基因重组表达技术在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中对其进行异源表达,并通过镍柱亲和层析对其纯化后进行酶学性质表征。结果表明,嗜热海藻糖酶Adb1332属于GH13_29亚家族,在大肠杆菌中能成功表达,其最适反应温度为60 ℃,在此温度下持续孵育48 h,相对酶活仍>80%,且在40~60 ℃范围内保持高效催化性能;最适pH为6.0,在pH 5.5~7.0条件下孵育24 h,相对酶活维持在40%以上,显示出广泛的酸碱适应性。此外,嗜热海藻糖酶Adb1332可耐受体积分数20%甲醇、10%乙醇及10%异丙醇;Fe2+、Mn2+和Cu2+能促进酶活,而Hg2+则抑制酶活;吐温20能促进酶活,而十二烷基硫酸钠抑制酶活;嗜热海藻糖酶Adb1332对海藻糖具有专一性,酶促反应动力学参数米氏常数（Km）值为（284.06±28.58）,最大反应速率（Vmax）为（0.30±0.01） mmol/（L·min）,其主要通过氢键与底物连接,催化位点为天冬氨酸（Asp）193、Asp323和谷氨酸（Glu）248。该研究为海藻糖酶Adb1332在发酵工业中的应用提供了科学依据。
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