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—— 中国食品杂志社
为建立高效评估白酒微量成分自噬调节活性的方法,该研究以人正常肝细胞LO2为载体,采用慢病毒转导与流式细胞术分选的方法构建并筛选稳定高效表达细胞自噬通量探针GFP-LC3-RFP-LC3ΔG的细胞株。通过流式细胞术检测绿色荧光蛋白（GFP）/红色荧光蛋白（RFP）荧光强度的比值,并结合免疫印记（WB）分析LC3和P62蛋白表达水平,系统评价白酒中两种微量成分（月桂酸和4-甲基愈创木酚）对细胞自噬的影响。结果表明,成功构建并筛选得到稳定高效表达细胞自噬通量探针GFP-LC3-RFP-LC3ΔG的细胞株LO2-GFP-RFP,其能灵敏响应细胞自噬调节,通过对其进行饥饿处理可使GFP/RFP值从85.05%降至80.61%,而通过饥饿处理同时加入自噬抑制剂巴佛洛霉素A1（BafA1）后可使GFP/RFP值回升至83.22%。通过自噬通量探针结合流式检测技术与WB相互印证了月桂酸和4-甲基愈创木酚在一定浓度范围内对细胞自噬的调控作用。该研究证实基于自噬通量探针结合流式检测技术适用于白酒微量成分自噬活性的快速筛选,为解析白酒健康效应提供了有效方法平台。
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